Влияние комплексоната титана на некоторые биохимические показатели и продуктивность цыплят-бройлеров

Таким образом, благодаря высокой биологической активности хелатные соединения биогенных металлов находят все более широкое применение для профилактики, лечения как животных, так и птиц.

1.5 Заключение по обзору литературы

В организме можно обнаружить почти все элементы, которые есть в земной коре и морской воде. Согласно биохимической теории В. И. Вернадского существует биогенная миграция атомов по цепочке: почваводапищачеловек.

Для 30 элементов биогенность установлена, а остальные элементы отнесены к примесным. К их числу отнесен и титан.

Его местонахождение в периодической системе Д. И. Менделеева позволяет предположить, что по своему биологическому действию на живой организм он близок к железу, цинку, кобальту и меди, биогенность которых установлена и имеется большой экспериментальный материал по их положительному влиянию на организм как в виде солей неорганических соединений, так и в виде хелатообразующих комплексов.

Синтезированный на кафедре общей и биоорганической химии ЧГМА комплексонат титана марки Т-3 имеет ЛД50 в широком интервале - 1500 - 2400 мг/кг живой массы. В опытах на лабораторных животных, с дозировкой 10 мг/кг, он повышает фагоцитарную активность клеток.

Свойства ионов титана в водных биологических средах определяются электронным строением его атомов. Высокий заряд ионов, их малый радиус, большое число свободных орбиталей способны образовывать устойчивые степени окисления (+3) и (+4). поэтому микроэлемент титана способен образовывать комплексонаты с аминокислотами, пептидами, белками и гормонами, является катализатором окислительных процессов у растений и в животном организме, участвует в кроветворении, повышает эритропоэз, катализирует синтез гемоглобина.

Комплексонат титана не раздражает слизистую оболочку глаз и неповрежденную кожу. Сенсибилизированные свойства не выявлены, кумулятивные свойства не выражены. Коэффициент кумуляции 0.9-3.0, что указывает на низкую потенциальную опасность химического отравления препаратами.

Анализ полученных результатов позволяет констатировать, что титансодержащие соединения оказывают дозозависимое влияние на иммунный ответ живого организма.

Итак, определенной дозировки применения комплексоната титана в качестве кормовой добавки в имеющейся литературе нет, а самой низкой рекомендуемой дозировкой является 0,1% от живой массы, но она требует уточнения. Неполные данные о биологической роли титана в организме и возможности его применения в качестве стимулятора роста требуют дальнейшего изучения.

2. Собственные исследования

2.1 Состав и свойства разнолигандного фосфорсодержащего комплексоната титана марки Т-4.

Разнолигандный фосфорсодержащий комплексонат титана марки Т-4 представляет собой 20,0% водный раствор в виде прозрачной опалесцирующей жидкости зеленоватого цвета, без запаха, устойчивый при хранении. Раствор хорошо смешивается с водой.

В качестве первичного лиганда выступает гидроксиэтилидендифосфоновая кислота (ОЭДФ):

СН3

(НО)2ОР---------- С ----------- РО(ОН)2

ОН

ОЭДФ содержит две фосфоновые группы и кислотный центр СН2РО3Н2. Оригинальность этой группы заключается в том, что в его своеобразной стереохимии, которая отличается от стереохимии карбоксильной группы, фосфонат-ион имеет форму искаженного тетраэдра с осью симметрии третьего порядка. Этот ион обладает большею электроотрицательностью и потенциально большей дентатностью. Имеет большое разнообразие протонированных форм: РО32-, НРО3-, Н2РО3.

Наличие в молекуле комплексона -ОН группы определяет способность его взаимодействия с переходными металлами в широком интервале и образование устойчивых полиядерных комплексонатов, которые не токсичны, достаточно растворяемы в воде, способны превращать переходные металлы в биологически активные формы, обладающие высокой мембранопроницаемостью.

ОЭДФ обладает эффектом субстехиометрического взаимодействия, сильными нуклеофильными свойствами. Введение в комплексонат вторичного неорганического лиганда повышает устойчивость, растворимость и электрофильные свойства лигандной составляющей комплексоната, а микроэлемент переводит в биологически активную форму, обладающий высокой мембранопроницаемостью.

Спектрофотометрическим методом изучен состав и оптические характеристики комплексоната, доказано образование разнолигандного комплекса, показано наличие в спектрах двух характерных полос поглощения в ультрафиолетовых и видимых областях спектра. Мольное соотношение компонентов в комплексоне Ti - L1 - L2 = 1: 1: 1. Увеличение концентрации титана более 10-4 моль/л способствует образованию полимерных форм и устойчивых комплексов lgКу=10,15, тогда как у однолигандного комплекса титана с ОЭДФ - lgКу=6,3.

Координация лигандов титаном создает дополнительные условия для окислительно-восстановительного взаимодействия между центральным ионом и лигандами, т.к. имеется непосредственная связь между окислителем и восстановителем, обеспечивающая переход электронов. ФКТ склонен к образованию гетеровалентных и гетероядерных соединений, при этом мостиковую функцию выполняет комплексон. В растворе данный тип комплекса играет роль своеобразного «черного ящика», наполненного электронами и протонами. В зависимости от условий он может отдавать их другим компонентам или пополнять свои «запасы», что определяется восстановительной способностью лигандов, расстоянием передачи электрона.

Комплексонат титана марки Т-4 отличается от разнолигандного ФКТ-3 составом вторичного неорганического лиганда L2, в котором основополагающий элемент не атом кислорода, а элемент значительно усиливающий восстановительные свойства лигандов. В условиях применения в теологических системах он проявляет низкую степень окисления, что обеспечивает более высокую восстановительную активность неорганического лиганда.

ФКТ является аналогом эндогенных хелатных соединений, соответствует тесту на целесообразность его применения в сельском хозяйстве. Проведены санитарно-токсикологические испытания наработанной партии ФКТ-4, его применение разрешено при соблюдении санитарно-гигиенических и санитарно-технических требований, предъявляемых к работе с препаратом. ФКТ утвержден главным государственным врачом г. Москвы.

2.2 Методика, схема и техника проведения опыта

В целях изучения поставленных нами задач в период с июля по сентябрь 2000 г на базе ЗАО «Равис» птицефабрика Сосновская Сосновского района Челябинской области был проведен научный (физиологический), научно-хозяйственный и производственный эксперимент на бройлерах кросса «Смена» в возрасте 1-45 дней.

Группы из цыплят-бройлеров на научный и научно-хозяйственный опыт, а также при производственной апробации были сформированы по принципу аналогов, с учетом живой массы, состояния здоровья, кросса.

В каждой группе в физиологическом опыте было по 5 голов, в научно-хозяйственном - по 200 и в производственном опыте: в контрольной -1207, а в опытной - 1170 голов.

В период проведения опыта хозяйство было благополучно по инфекционным и инвазионным болезням. Научно-хозяйственный опыт проводился по схеме, представленной в таблице 2.

Схема опыта

Все подопытные цыплята в подготовительный период получали нулевой рацион, применяемый на птицефабрике. С 5-ти дневного возраста цыплятам 2-й, 3-й и 4-й опытным группам с питьевой водой задавали комплексонат титана согласно дозировки, приведенной в схеме опыта.

Вся подопытная птица находилась в одном птичнике (№64), условия кормления и содержания были одинаковыми. Обслуживалась птица одним слесарем - оператором и птичницей.

В ходе научно-хозяйственного опыта учитывали следующие показатели:

зоогигиеническую оценку помещения;

условия кормления подопытной птицы;

живую массу цыплят;

состояние и сохранность птицы;

гематологические показатели;

переваримость питательных веществ кормосмесей;

баланс азота, Ca, P, микроэлементов;

мясную продуктивность бройлеров;

резистентность организма цыплят-бройлеров;

бактерицидное действие комплексоната титана;

минеральный состав костяка, мышечной ткани птицы.

Результаты опытов обрабатывались биометрически на микрокалькуляторе при помощи метода Р. Б. Стрелкова (136). Метод рекомендован для статистической обработки экспериментальных данных в области биологии, ветеринарии и медицины, а также на ПЭВМ с использованием программы Microsoft Excel. Достоверностью считали разницу при Р<0,05.

Состояние бройлеров учитывали ежедневным осмотром, принимая во внимание аппетит, подвижность птицы, сохранность поголовья - путем ежедневного учета птицы.

Живую массу определяли с точностью до 5,0 г путем индивидуального еженедельного взвешивания 15% одних и тех же бройлеров из каждой группы. Среднесуточный и относительный приросты рассчитывали по общепринятым методикам.

В зоогигиеническую оценку помещения входило: учет плотности посадки птицы, освещенность, продолжительность светового дня, исследование температуры и относительной влажности воздуха психрометром Августа, аммиака - универсальным газоанализатором УГ-2, освещенность - люксметром Ю-116. Температуру и относительную влажность воздуха определяли ежедневно, аммиак и освещенность - еженедельно, на уровне 3 яруса, где содержалась подопытная птица (123).

Поедаемость корма - путем ежедневного учета дачи и остатков комбикорма. Химический состав и питательность кормосмеси проводили в межкафедральной лаборатории УГАВМ по общепринятым методикам (86, 91, 114): первоначальную воду - методом высушивания навески корма в сушильном шкафу при температуре 65 оС до постоянной массы; гигроскопическую воду - методом высушивания навески корма в сушильном шкафу при температуре 100-105 оС до постоянной массы; «сырую» золу - сжиганием навески корма в муфельной печи при температуре 500-600оС; «сырой» протеин - по методу Кьельдаля (91); «сырую» клетчатку -кипячением в слабых растворах кислот и щелочей по методу Геннеберга и Штомана (86); «сырой» жир - экстракцией сернокислым эфиром в аппарате Сокслета (114); кальций - трилонометрическим методом (151); фосфор - методом - колориметрии (151). Содержание аминокислот взято из данных удостоверения качества комбикормов ПК-5 и ПК-6, завозимых на Сосновскую птицефабрику с Челябинского комбината хлебопродуктов.

Микроэлементы Cu, Fe, Zn, Co, Mn, Ni, Pb определяли на атомно-абсорбционном спектрофотометре (137,138).

2.3 Методика проведения балансового опыта

Для изучения влияния различных дозировок комплексоната титана на переваримость и использование питательных веществ кормосмеси был проведен балансовый опыт в конце выращивания на 5 аналогичных по массе бройлерах, характерных для каждой группы, по методике ВНИТиП (143) и методу М. И. Дьякова (95). Продолжительность балансового опыта 13 дней, из которых 5 дней учетных.

Птица содержалась в отдельных клетках с сетчатым дном, под которым установлены каркасы из полиэтиленовой пленки для сбора помета.

В течение балансового опыта ежедневно учитывали количество съеденного корма, путем учета остатков корма от заданного и количество выделенного помета. Помет собирали дважды в день (утром и вечером), взвешивали, помещали в двойные полиэтиленовые пакеты (тщательно закрываемые), заливали 0,1 н раствором щавелевой кислоты (2 мл на 50 г помета) для связывания аммиака. Количество пошедшей кислоты учитывали при определении первоначальной воды. Помет хранили в холодильнике на нижней полке.

Химический анализ кормосмеси, помета проводили в межкафедральной лаборатории УГАВМ по общепринятым методикам, указанным выше. Азот кала определяли по методу М.И. Дьякова (95).

Коэффициенты переваримости, балансы азота, кальция и фосфора вычисляли по общепринятым методикам.

В конце балансового опыта у 5 бройлеров из каждой группы из подкрыльцовой вены была взята кровь утром и в течение 2 часов доставлена в отдел биохимического анализа межкафедральной лаборатории УГАВМ для исследования.

2.4 Методика лабораторных исследований

В межкафедральной лаборатории УГАВМ в цельной крови определяли:

глюкозу - глюкозооксидазным методом при помощи набора «Глюкоза - ФКД»(80). При окислении бета- Д - глюкозы кислородом воздуха под действием глюкозооксидазы образуется эквимолярное количество перекиси водорода, которая окисляет хромогенные субстраты в присутствии фенольных соединений с образованием окрашенного продукта, интенсивность окраски которого прямо пропорциональна концентрации глюкозы;

гемоглобин - гемоглобинцианидным методом при помощи набора химических реактивов для определения массовой концентрации гемоглобина крови (116). Гемоглобин при взаимодействии с железосинеродистым калием окисляется в метгемоглобин, образующий с ацетонциангидридом окрашенный гемоглобинцианид, интенсивность окраски которого пропорциональна содержанию гемоглобина;

подсчет эритроцитов и лейкоцитов - проводили в камере Горяева (80) путем подсчета клеток белой и красной крови соответственно в 5-ти больших квадратах и 5-ти полосах;

дифференцированный подсчет лейкоцитов (лейкограмма) - проводился в мазках крови окрашенных по методу Романовского - Гиза (69,79,130).

Из биохимических показателей в сыворотке крови по общепринятым методикам (8,28,69,80,102,116,117,120,151) определяли:

- общий белок - рефрактометрическим методом на рефрактометре типа «RL- 2», в основу которого положено определение показателя преломления исследуемого вещества. В сыворотке крови величина рефракции, в первую очередь, зависит от количества белка (80);

- белковые фракции - нефелометрическим экспресс методом (8), основанном на способности отдельных фракций белка осаждаться фосфатными растворами определенной концентрации;

- холестерин -при помощи набора «БИО-ЛА-ТЕСТ» (8). Холестерин в присутствии уксусного ангидрида и смеси уксусной и серной кислот дает изумрудно-зеленое окрашивание, интенсивность которого прямо пропорциональна его концентрации;

- общие липиды - фотоколориметрическим измерением оптической плотности жировой эмульсии, которая образуется при взаимодействии серной кислоты с экстрактом липидов, полученном при инкубации сыворотки крови и смеси Блюра (40);

- липопротеиды - фотоколориметрическим методом по Бурштейну. В основе метода лежит реакция избирательного осаждения бета-липопротеидов гепарином в присутствии двухвалентных катионов (40);

аминный азот - по реакции с нингидрином. Аминокислоты при взаимодействии с нингидрином подвергаются окислению, при этом образуется соединение, окрашенное в фиолетовый цвет, интенсивность окрашивания при определенных условиях пропорциональна количеству свободных аминокислот (80);

кальций - трилонометрическим методом с индикатором флюорексоном по Вичеву и Каракашеву (151). Метод основан на различной прочности комплексных соединений, образуемых кальцием, флуорексоном и трилоном Б;

фосфор - определение в безбелковом фильтрате крови с ванадат-молибденовым реактивом (по Пулсу в модификации В.Ф. Коромыслова и Л.А. Кудрявцевой). Метод основан на том, что фосфор в безбелковом фильтрате дает лимонно-желтое окрашивание (151).

Микроэлементы крови - определяли методом атомно-абсорбционной спектрофотометрии (137,138).

Для исследования минерального состава костяка брали левую и правую большеберцовые кости у 5-ти бройлеров из подопытных групп, в которых определяли золу, кальций, фосфор, микроэлементы по описанным выше методикам.

Мясную продуктивность определяли в конце опыта путем проведения контрольных убоев 5-ти цыплят-бройлеров из каждой группы по методике ВИЖ (117,144), ВНИТиП (147). При этом определяли предубойную, убойную массу, массу тушки, массу съедобных и несъедобных частей, внутреннего жира. Химический состав белого и темного мяса проводили по О.И. Маслиевой (95) и С.И. Матрозовой (97).

Калорийность мяса определяли расчетным путем по химическому составу и калорическим коэффициентам: 1 г жира = 9,3 ккал, 1 г белка = 4,1 ккал. Энергетическая ценность мяса (кДж) рассчитали исходя из того, что 1 ккал соответствует 4,186 кДж.

Ветеринарно-санитарную оценку мяса на органолептические и физико-химические показатели проводили на кафедре «Товароведения и экспертизы продуктов» УГАВМ по методике А.И. Сердюка и А.И. Пархаевой (23).

Экологическую чистоту продукции оценивали по результатам исследования мяса на содержание в нем никеля, меди, свинца методом атомно-абсорбционной спектрофотометрии (137,138)

Бактерицидное действие комплексоната титана на патогенную микрофлору кишечника птицы определяли методом бумажных дисков (121).

Влияние комплексоната титана на серологический контроль напряженности иммунитета при Ньюкаслской болезни птиц определяли с помощью реакции задержки гемагглютинации, по методике, разработанной Главным управлением ветеринарии 1979 года (103).

2.5 Условия содержания и кормления подопытной птицы

Цыплята контрольной и опытных групп содержались в птичнике N 64 бройлерного цеха. Птичник размером 18х96х3.2м оборудован водопроводом, канализацией, электроосвещением. Пол в помещении бетонированный, устойчивый к мойке и дезинфекции.

Подопытная птица содержалась в трехступенчатых каскадных батареях БКМ - 3Б размером 88.5х2.1х1.85 м. В птичнике размещено 8 батарей.

В батарее 564 клетки размером 88.8х57.8х38.4 см. В каждую клетку 3-его яруса было посажено 14 - 15 бройлеров подопытных групп.

Клеточная батарея имеет бункер-дозатор, из которого корм поступает в желобковые кормораздатчики, установленные на каждом ярусе.

Поение подопытной птицы осуществлялось из микрочашечных поилок, клапанного типа по две в каждой клетке. По мере роста птицы уровень поилок в клетке регулировался.

Страницы: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13